В ходе выполнения проекта по Соглашению о предоставлении субсидии от 09.09.2014 № 14.616.21.0001 с Минобрнауки России в рамках федеральной целевой программы «Исследования и разработки по приоритетным направлениям развития научно-технологического комплекса России на 2014-2020 годы» на этапе № 2 в период с 01.01.2015 по 30.06.2015 выполнялись следующие работы:

1. Разработка быстрого метода определения алкалофильной лакказной активности микроорганизмов.

2. Скрининг экстремофильных грибных и бактериальных штаммов из коллекций микроорганизмов ЛЕДОС и ВКМ ИБФМ РАН, продуцирующих алкалофильную лакказную активность.

3. Скрининг отобранных штаммов на предмет лакказной активности с природными и неприродными монолигнолами.

4. Оптимизация культивирования отобранных грибных и бактериальных штаммов с целью повышения выхода алкалофильной лакказной активности с природными и неприродными монолигнолами.

При этом были получены следующие результаты:

1) краткое описание основных полученных результатов (основные теоретические и экспериментальные результаты, фактические данные, обнаруженные взаимосвязи и закономерности) с указанием работ, в рамках которых они были получены);

• Разработан быстрый микрометод определения алкалофильной лакказной активности микроорганизмов посредством хромогенной реакции. Метод позволяет использовать минимальные объемы тестируемых биологических жидкостей, что значительно сокращает объемы культивационных работ, дает возможность быстрого проведения скрининга большого количества штаммов во времени, и в течение короткого времени и в минимальном объеме позволяет оценить рН-оптимум продуцируемых грибами оксидаз в реакциях с индикаторами.
• Осуществлен скрининг экстремофильных грибных и бактериальных штаммов из коллекций микроорганизмов ЛЕДОС и ВКМ ИБФМ РАН, продуцирующих алкалофильную лакказную активность. Было отобрано 8 штаммов-продуцентов алкалофильных лакказ (3 аскомицета, 1 базидиомицет и 4 грамположительных бактериальных штамма). Представлено 3 акта о проведении скрининга грибных и бактериальных штаммов.
• Проведен скрининг отобранных грибных и бактериальных штаммов на предмет лакказной активности с природными и неприродными монолигнолами. Все 8 отобранных штаммов продуцируют оксидазы, способные окислять монолигнолы с разной субстратной избирательностью. Представлено 2 акта о получении лабораторных образцов грибных и бактериальных штаммов-продуцентов алкалофильных лакказ, специфичных к природным и неприродным монолигнолам.
• Оптимизацированы условия культивирования отобранных грибных и бактериальных штаммов с целью повышения выхода алкалофильной лакказной активности с природными и неприродными монолигнолами. Предложены методика культивирования штаммов-продуцентов алкалофильных лакказ, обеспечивающая повышение выхода целевого фермента, и методические рекомендации по культивированию штаммов-продуцентов алкалофильных лакказ, обеспечивающие повышение выхода целевого фермента.

2) оценка элементов новизны научных, конструкторских и технологических решений, информация о полученных на отчетном этапе охраноспособных РИД;

В результате проведенных работ удалось разработать ранее не упоминающийся в литературных источниках эксклюзивный микрометод быстрого определения алкалофильной лакказной активности микроорганизмов посредством хромогенной реакции с использованием эффективных индикаторов алкалофильности лакказ.

Разработанный метод позволил провести объемный скрининг среди большого количества грибных и бактериальных штаммов из коллекций ИБФМ РАН, результатом которого стал отбор 8 ранее не описанных в литературе грибных и бактериальных штаммов, продуцирующих алкалофильные лакказы, активные с монолигнолами.

Впервые использовано тестирование широкого спектра ростовых субстратов, повышающих выход лакказной активности большинства отобранных штаммов, что позволило достичь в ряде случаев высоких выходов лакказной активности, достаточных для последующего получения гомогенных препаратов лакказ.

3) оценку соответствия полученных результатов техническим требованиям к выполняемому проекту и перспектив продолжения работ по проекту.

Работы, запланированные на 2-м этапе проекта в Плане-Графике (Приложение № 2 Соглашения № 14.616.21.0001), выполнены в полном объеме.
Результаты проведенных на этапе 2 работ соответствуют требованиям, изложенным в Техническом Задании (Приложение № 1 Соглашения № 14.616.21.0001).

Результаты оформлены в виде отчета о ПНИР, к которому приложены в виде отдельных документов: 1) акт о проведении скрининга штаммов грибов аскомицетов и оомицетов, 2) акт о проведении скрининга штаммов грибов базидиомицетов; 3) акт о проведении скрининга бактериальных штаммов; 4) акт о получении лабораторных образцов грибных штаммов-продуцентов алкалофильных лакказ, специфичных к природным и неприродным монолигнолам; 5) акт о получении лабораторных образцов бактериальных штаммов-продуцентов алкалофильных лакказ, специфичных к природным и неприродным монолигнолам; 6) Методика культивирования штаммов-продуцентов алкалофильных лакказ, обеспечивающая повышение выхода целевого фермента; 7) Методические рекомендации по культивированию штаммов-продуцентов алкалофильных лакказ, обеспечивающие повышение выхода целевого фермента; 8) Метод определения алкалофильной лакказной активности микроорганизмов