Этап 2.

Тема: «Влияние аварийных разливов нефти на микробное разнообразие в поверхностных водах и седиментах Балтийского моря в летний и зимний периоды»

В ходе выполнения проекта по Соглашению о предоставлении субсидии от 24.08.2015г. №14.616.21.0038 с Минобрнауки России в рамках федеральной целевой программы «Исследования и разработки по приоритетным направлениям развития научно-технологического комплекса России на 2014–2020 годы» на этапе №2 в период с 01.01.2016 по 30.06.2016 выполнялись следующие работы:

По п.1.1 Плана-графика (ПГ): выделены из проб воды и седиментов природные штаммы-деструкторы углеводородов нефти.

По п.1.2 ПГ: исследованы плазмидные профили и наличие катаболических генов у выделенных штаммов.

При этом были получены следующие результаты:

1. Краткое описание основных полученных результатов:

В результате выполнения поставленных задач было выделено 78 штаммов микроорганизмов деструкторов углеводородов нефти. Был разработан документ «Проект методических рекомендаций по выделению и характеристике эффективных углеводородокисляющих микроорганизмов». Выделенные микроорганизмы были охарактеризованы по следующим признакам: наличие плазмид Р-9 и Р-7 групп несовместимости, наличие гена катехол-2,3-диоксигеназы – ключевого фермента пути деградации полициклических ароматических углеводородов. На основании полученных данных был составлен «Акт о проведении исследования плазмидного профиля». Также была составлена кластерная дендрограма, демонстрирующая высокое биоразнообразие выделенных микробных штаммов. В коллекцию микроорганизмов с использованием традиционных микробиологических методов выделения штаммов, как из накопительных культур, так и прямым высевом на селективные среды могут войти бактерии 7, 11, 17, 19, 24, 30, 35, 37, 40 и 60 с меньшей вероятностью штаммы 9, 20, 21, 33, 43, 53, 55, 57, 69 и 71.

Описаны маркерные последовательности ДНК, позволяющие определить присутствие в окружающей среде исследуемых микроорганизмов без необходимости проведения генных модификаций. Составлена характеристика обнаруженных катаболических генов с использованием метода ПЦР со специфическими олигонуклеотидными праймерами.

В рамках выполнения работы сотрудниками Департамента наук об окружающей среде Университета Хельсинки (Финляндия) были разработаны методики выделения ДНК из морской воды и седиментов. Также были проведены работы по выделению из проб воды и седиментов природных штаммов-деструкторов нефти представителями Института молекулярной и клеточной биологии Университета Тарту (Эстония). Определение общего микробного числа для воды и седиментов Балтийского моря дало средние значения 1,3×104 КОЕ/мл и 5×105КОЕ/г для образцов воды и седиментов, соответственно. При проверке более, чем 200 изолятов было выделено 6 классов микроорганизмов, присутствующих в воде Финского залива: три класса Proteobacteria (Alpha-, Beta- и Gammaproteobacteria), Chloroflexy, Actinobacteria и Cyanobacteria. Из образцов, выделенных из морской воды, были выделены и идентифицированы 114 углеводородокисляющих изолятов. Из образцов седиментов выделены и охарактеризованы 93 углеводородокисляющих изолята.

2. Оценка соответствия полученных результатов техническим требованиям к выполняемому проекту и перспектив продолжения работ по проекту.

В соответствии с приложением 1 к Соглашению в рамках выполнения 2 этапа были получены научно-технические результаты, соответствующие требованиям к выполняемому проекту.

В ходе выполнения проекта подготовлены следующие документы: 1) Акт о проведении исследования плазмидного профиля; 2) Проект методических рекомендаций по выделению и характеристике эффективных углеводородокисляющих микроорганизмов; 3) Отчет о научных исследованиях.

Комиссия Минобрнауки России признала обязательства по Соглашению на отчетном этапе исполненными надлежащим образом.